2 × Pfu PCR микс

Ултра-чиста висока верност Taq ДНК полимераза.

Pfu DNA Polymerase се изразува од E.coli со клониран Pyrococus Furiosis DNA Polymerase ген и се прочистува и се одвојува со повеќекратно прочистување на колоните. Бидејќи Pfu има активност 3′-5 ′ егзонуклеаза, може да се лекторира во процесот на засилување на ДНК, додека традиционалната Taq ДНК полимераза не може. Иако другите полимерази на Taq DNA како Vent, Deep Vent, Tli, UITma, итн. Имаат функции за лекторирање, Pfu има најниска стапка на несовпаѓање меѓу сите досега пронајдени Taq DNA полимерази. Pfu DNA Polymerase има подобра термичка стабилност од вообичаената Taq DNA полимераза и може да одржува повеќе од 90% активност на 95 ° C за 1 час.

Една цевка Pfu PCR Mix (Национална сертификација за високотехнолошки производи)

Mix Pfu PCR Mix ја подобри специфичноста и чувствителноста на PCR реакцијата и може да ги засили сложените шаблони со висока содржина на GC, секундарна структура и слично. Може да се засилат дури 2 копии од целниот образец, обезбедувајќи попрецизни експериментални резултати.

■ Единствената формула Pfu MasterMix го прави целиот систем за реакција многу стабилен и активноста нема да влијае на повторното замрзнување-одмрзнување или долгорочно складирање на 4 ° C.

■ Стабилниот и ефикасен претходно подготвен PCR микс раствор може да ја направи операцијата брза и едноставна, во голема мера намалувајќи го интензитетот на трудот и грешката при земање примероци. Во мешавината се исто така вклучени PCR засилувач и оптимизатор со високи перформанси, со што се намалуваат барањата за PCR услови.

■ Овој производ има и системи што содржат боја и без бои. Производите на ПЦР Микс што содржат боја може директно да се електрофоризираат по ПЦР, без додавање тампон за примерок.

Мачка. Бр Големина на пакување
4992780 1мл
4992781 5*1мл
4992782 1мл
4992906 5*1мл

Детали за производот

Работен тек

Најчесто поставувани прашања

Тагови на производи

Дефиниција на активност

Активноста на 1 единица (U) Pfu ДНК полимераза е дефинирана како количина на ензим потребен за инкорпорирање на 10 nmol деоксинуклеотиди во супстанции нерастворливи во киселина на 74 ° C во рок од 30 мин со употреба на активирана ДНК на сперма од лосос како шаблон/прајмер.

Контрола на квалитет

Чистотата со детекција на SDS-PAGE е повеќе од 99%; Не е откриена активност на егзогена нуклеаза; Генот од една копија во човечкиот геном може ефективно да се засили; Нема значителни промени во активноста кога се чуваат на собна температура една недела.

Главни технички параметри

Има активност 3′-5 ′ егзонуклеаза и нема активност 5′-3 ′ егзонуклеаза. Брзината на продолжување на засилување на ДНК е помала од онаа на Taq полимеразата, и генерално брзината на продолжување на Pfu ензимот е 0,5-1 kb во минута. Термичката стабилност на Pfu е подобра од Taq. За шаблони со висока содржина на GC, температурата на денатурација може да се зголеми на 98 ° C, што нема влијание врз активноста на Pfu полимеразата. Производот на ПЦР е со тап завршеток, кој може да се додаде со 3'-dA настрешници пред да се поврзе со ТА-вектор или да се клонира со вектор со тапи завршетоци

Апликации

Може да се користи за засилување на ДНК со голема верност, како што е клонирање на генска експресија, мутација насочена кон локацијата, анализа на единечен нуклеотиден полиморфизам (СНП) и завршување на поправка.

Сите производи може да се прилагодат за ODM/OEM. За детали,кликнете на Приспособена услуга (ODM/OEM)


  • Претходно:
  • Следно:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Користете геномска ДНК како образец за да засилите фрагмент од 1kb.
    По реакцијата на ПЦР, земете 5 μl за откривање електрофореза.
    П: Нема појаси за засилување

    Шаблон А-1

    ■ Шаблонот содржи нечистотии од протеини или инхибитори на Taq, итн. —— Прочистете го образецот на ДНК, отстранете ги нечистотиите од протеините или извлечете ДНК на шаблонот со комплети за прочистување.

    ■ Денатурацијата на шаблонот не е целосна —— Соодветно зголемување на температурата на денатурација и продолжување на времето на денатурација.

    Deg Деградација на шаблон-—Подгответе го образецот.

    А-2 Буквар

    Or Лош квалитет на прајмери-—По-синтетизирајте го прајмерот.

    Deg Деградација на прајмер —— Поделете ги прајмерите со висока концентрација во мал волумен за зачувување. Избегнувајте повеќекратно замрзнување и одмрзнување или долгорочно крио-конзервирано 4 ° C.

    Несоодветен дизајн на прајмери ​​(на пр. Должината на прајмерот не е доволна, димер формиран помеѓу прајмерите итн.)

    А-3 мг2+концентрација

    ■ Мег2+ концентрацијата е премногу ниска —— Правилно зголемување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-4 Температура на огревање

    ■ Високата температура на печење влијае врз врзувањето на прајмерот и шаблонот. - Намалете ја температурата на огнот и оптимизирајте ја состојбата со градиент од 2 ° C.

    А-5 Време на продолжување

    ■ Кратко време на продолжување —— Зголемете го времето на продолжување.

    П: Лажно позитивно

    Феномени: Негативните примероци исто така ги покажуваат опсезите на целната секвенца.

    А-1 Контаминација на ПЦР

    ■ Вкрстена контаминација на целната секвенца или производи за засилување —— Внимателно да не го пипетирате примерокот што содржи целна секвенца во негативниот примерок или да не го истурите од цевката за центрифуга. Реагенсите или опремата треба да бидат автоклавирани за да се елиминираат постојните нуклеински киселини, а постоењето на контаминација треба да се утврди преку негативни контролни експерименти.

    Контаминација со реагенс —— Активирајте ги реагенсите и чувајте ги на ниска температура.

    А-2 премиерr

    ■ Мег2+ концентрацијата е премногу ниска —— Правилно зголемување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    Неправилен дизајн на прајмер, а целната секвенца има хомологија со нишантната секвенца. —— Редизајнирани буквари.

    П: Неспецифично засилување

    Феномени: Лентите за засилување на ПЦР се неконзистентни со очекуваната големина, големи или мали, или понекогаш се појавуваат и специфични појаси за засилување и неспецифични појаси.

    А-1 Буквар

    ■ Лоша специфичност на прајмерот

    --— Буквар за повторно дизајнирање.

    Concentration Концентрацијата на прајмерот е премногу висока —— Правилно зголемување на температурата на денатурација и продолжување на времето на денатурација.

    А-2 мг2+ концентрација

    ■ На Mg2+ концентрацијата е превисока —— Правилно намалете ја концентрацијата на Mg2+: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Прекумерна количина ензим —— Намалете ја количината на ензим соодветно во интервали од 0,5 У.

    А-4 Температура на огревање

    Temperature Температурата на загревање е премногу ниска-—соодветно зголемете ја температурата на огнување или усвојте го двостепениот метод на загревање

    Циклуси А-5 ПЦР

    ■ Премногу PCR циклуси —— Намалете го бројот на PCR циклуси.

    П: Лепливи или размачкани ленти

    А-1 Буквар—— Лоша специфичност —— Редизајнирајте го прајмерот, сменете ја положбата и должината на прајмерот за да ја подобрите неговата специфичност; или изведете вгнездени ПЦР.

    Шаблон ДНК А-2

    - Шаблонот не е чист - Прочистете го образецот или извлечете ДНК со комплети за прочистување.

    А-3 мг2+ концентрација

    - —Мг2+ концентрацијата е превисока —— Правилно намалување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-4 dNTP

    - Концентрацијата на dNTP е превисока - соодветно намалете ја концентрацијата на dNTP

    А-5 Температура на огнување

    —— Премногу ниска температура на огнување —— Соодветно зголемување на температурата на огнување

    Циклуси А-6

    —— Премногу циклуси —— Оптимизирајте го бројот на циклусот

    П: Колку шаблонска ДНК треба да се додаде во 50 μl PCR реакционен систем?
    ytry
    П: Како да се засилат долгите фрагменти?

    Првиот чекор е да се избере соодветна полимераза. Редовната Taq полимераза не може да се лекторира поради недостаток на активност на 3'-5 'егзонуклеаза, а несовпаѓањето во голема мера ќе ја намали ефикасноста на продолжувањето на фрагментите. Затоа, редовната Taq полимераза не може ефикасно да ги засили целните фрагменти поголеми од 5 kb. Taq полимеразата со специјална модификација или друга полимераза со голема верност треба да се избере за да се подобри ефикасноста на продолжувањето и да се задоволат потребите за долго засилување на фрагменти. Покрај тоа, засилување на долги фрагменти, исто така, бара соодветно прилагодување на дизајнот на прајмер, време на денатурација, време на продолжување, тампон pH вредност, итн. Обично, прајмерите со 18-24 п.п. може да доведат до подобар принос. Со цел да се спречи оштетување на шаблонот, времето на денатурација на 94 ° C треба да се намали на 30 секунди или помалку по циклус, а времето за покачување на температурата на 94 ° C пред засилување треба да биде помало од 1 мин. Покрај тоа, поставувањето на температурата за продолжување на околу 68 ° C и дизајнирањето на времето на продолжување според стапката од 1 kb/min може да обезбеди ефикасно засилување на долги фрагменти.

    П: Како да се подобри верноста на засилување на ПЦР?

    Стапката на грешка при засилување на ПЦР може да се намали со употреба на разни ДНК полимерази со голема верност. Меѓу сите пронајдени досега полимерази на Taq DNA, Pfu ензимот има најниска стапка на грешка и најголема верност (видете ја приложената табела). Покрај селекцијата на ензими, истражувачите можат дополнително да ја намалат стапката на мутација на ПЦР со оптимизирање на условите на реакција, вклучувајќи оптимизирање на тампон составот, концентрација на термостабилна полимераза и оптимизирање на бројот на циклусот на ПЦР.

    Напишете ја вашата порака овде и испратете ни ја