Комплет Ultra HiFidelity PCR

Висока верност, висока специфичност и висока ефикасност на PCR премикс на топло стартување.

Ultra HiFidelity PCR Kit е нов премикс со висока верност за PCR засилување, погоден за клонирање и откривање поврзано со PCR. Ултра HiFi ДНК полимеразата содржана во комплетот е нова брза и високоверна ДНК полимераза развиена со насочена технологија за молекуларна еволуција. Го подобрува афинитетот на ДНК полимеразата кон шаблоните, ја подобрува брзината на засилување и способноста за продолжување на ензимот и ја зголемува стапката на успех на PCR и приносот на производот.

Мачка. Бр Големина на пакување
4992970 1мл
4992971 5*1мл
4992978 5*5*1мл

 

 


Детали за производот

Експериментален пример

Најчесто поставувани прашања

Тагови на производи

Карактеристики

■ Лесен за ракување: Овој комплет се испорачува како 2 × премикс, а PCR може да се изврши со едноставно додавање шаблони и прајмери.
■ Висока верност: Верноста е 50 пати поголема од онаа на Taq полимеразата.
■ Висока специфичност: Одлични перформанси за топло стартување за да се обезбеди специфичност на производот ..
■ Брзо засилување: Брзината на продолжувањето може да достигне 10-15 сек/кб.
Силна проширливост: Може да се засилат до 20 kb фрагменти од ДНК.
■ Широка применливост: Комплетот содржи PCR Enhancer и е погоден за засилување на високи GC и сложени шаблони.

Спецификација

Тип: ДНК полимераза со голема верност
Брзина на засилување: 10-15 сек/кб
Големина на фрагмент: <20kb
Апликации: PCR засилување со голема верност, клонирање на гени, високо засилување на GC шаблон, клонирање на гени на комплексни геноми, засилување на висока верност на cDNA, откривање на SNP, мутација специфична за локацијата, итн.
Принос на екстракција на ДНК од разни растителни ткива:
Забелешка: Приносот на ДНК зависи од видовите примероци. Сите горенаведени материјали се од нежни лисја.

Сите производи може да се прилагодат за ODM/OEM. За детали,кликнете на Приспособена услуга (ODM/OEM)


  • Претходно:
  • Следно:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Топол почеток за да се обезбеди специфичност на производот
    Слика 1. Ултра HiFi има одлична функција за топло стартување за да се обезбеди специфичноста на производите за засилување. Беше применет методот на молекуларни светилници (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
    Experimental Example Одлична висока верност, 50 пати повисока од Taq полимераза
    Слика 2. Верноста на Ultra HiFi е 50 пати поголема од онаа на вообичаената Taq полимераза. Полимеризационата верност на Taq полимеразата (без корективна активност) се користи како референца.
    Experimental Example Брзо засилување и долги фрагменти може брзо да се засилат
    Сл. 3. Ултра HiFi може да се прошири до 5 секунди/kb за фрагменти помали од 4 kb. За долги фрагменти, времето на засилување може соодветно да се продолжи. За фрагменти повеќе од 15 kb, брзината може да биде до 30 сек/кб. М: TIANGEN D15000 Обележувач
    Experimental Example Experimental Example Experimental Example Силна универзалност и висока специфичност, лесна за читање висока ГК и долги фрагменти од различни извори
    Слика 4. Ултра HiFi има висока специфичност за да обезбеди стапка на успех за засилување и количина на производ за различни типови шаблони.
    A. Резултати од ултра HiFi засилување
    Б. Резултати за засилување на ензимските Hi-Fi на Добавувачот К
    C. Резултати за засилување на ензимот Hi-Fi на Добавувачот Н
    М: TIANGEN D15000 Обележувач
    Лента 1-5. Резултати од засилување на шаблони со различна должина: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3
    2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb
    Лента 6. Резултат на засилување на висок образец GC: 1915 bp (GC%: 70%);
    Лејн 7-11. Резултат на засилување на шаблони од 2 kb од различен геном: 7. Стаорец; 8
    Ориз; 9. Пченица; 10. Пченка; 11. Бактерии;
    Лејн 12-14. Резултат на засилување на фрагментот долг 8 kb: 12. Ориз; 13. Пченка;
    П: Нема појаси за засилување

    Шаблон А-1

    ■ Шаблонот содржи нечистотии од протеини или инхибитори на Taq, итн. —— Прочистете го образецот на ДНК, отстранете ги нечистотиите од протеините или извлечете ДНК на шаблонот со комплети за прочистување.

    ■ Денатурацијата на шаблонот не е целосна —— Соодветно зголемување на температурата на денатурација и продолжување на времето на денатурација.

    Deg Деградација на шаблон-—Подгответе го образецот.

    А-2 Буквар

    Or Лош квалитет на прајмери-—По-синтетизирајте го прајмерот.

    Deg Деградација на прајмер —— Поделете ги прајмерите со висока концентрација во мал волумен за зачувување. Избегнувајте повеќекратно замрзнување и одмрзнување или долгорочно крио-конзервирано 4 ° C.

    Несоодветен дизајн на прајмери ​​(на пр. Должината на прајмерот не е доволна, димер формиран помеѓу прајмерите итн.)

    А-3 мг2+концентрација

    ■ Мег2+ концентрацијата е премногу ниска —— Правилно зголемување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-4 Температура на огревање

    ■ Високата температура на печење влијае врз врзувањето на прајмерот и шаблонот. - Намалете ја температурата на огнот и оптимизирајте ја состојбата со градиент од 2 ° C.

    А-5 Време на продолжување

    ■ Кратко време на продолжување —— Зголемете го времето на продолжување.

    П: Лажно позитивно

    Феномени: Негативните примероци исто така ги покажуваат опсезите на целната секвенца.

    А-1 Контаминација на ПЦР

    ■ Вкрстена контаминација на целната секвенца или производи за засилување —— Внимателно да не го пипетирате примерокот што содржи целна секвенца во негативниот примерок или да не го истурите од цевката за центрифуга. Реагенсите или опремата треба да бидат автоклавирани за да се елиминираат постојните нуклеински киселини, а постоењето на контаминација треба да се утврди преку негативни контролни експерименти.

    Контаминација со реагенс —— Активирајте ги реагенсите и чувајте ги на ниска температура.

    А-2 премиерr

    ■ Мег2+ концентрацијата е премногу ниска —— Правилно зголемување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    Неправилен дизајн на прајмер, а целната секвенца има хомологија со нишантната секвенца. —— Редизајнирани буквари.

    П: Неспецифично засилување

    Феномени: Лентите за засилување на ПЦР се неконзистентни со очекуваната големина, големи или мали, или понекогаш се појавуваат и специфични појаси за засилување и неспецифични појаси.

    А-1 Буквар

    ■ Лоша специфичност на прајмерот

    --— Буквар за повторно дизајнирање.

    Concentration Концентрацијата на прајмерот е премногу висока —— Правилно зголемување на температурата на денатурација и продолжување на времето на денатурација.

    А-2 мг2+ концентрација

    ■ На Mg2+ концентрацијата е превисока —— Правилно намалете ја концентрацијата на Mg2+: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Прекумерна количина ензим —— Намалете ја количината на ензим соодветно во интервали од 0,5 У.

    А-4 Температура на огревање

    Temperature Температурата на загревање е премногу ниска-—соодветно зголемете ја температурата на огнување или усвојте го двостепениот метод на загревање

    Циклуси А-5 ПЦР

    ■ Премногу PCR циклуси —— Намалете го бројот на PCR циклуси.

    П: Лепливи или размачкани ленти

    А-1 Буквар—— Лоша специфичност —— Редизајнирајте го прајмерот, сменете ја положбата и должината на прајмерот за да ја подобрите неговата специфичност; или изведете вгнездени ПЦР.

    Шаблон ДНК А-2

    - Шаблонот не е чист - Прочистете го образецот или извлечете ДНК со комплети за прочистување.

    А-3 мг2+ концентрација

    - —Мг2+ концентрацијата е превисока —— Правилно намалување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-4 dNTP

    - Концентрацијата на dNTP е превисока - соодветно намалете ја концентрацијата на dNTP

    А-5 Температура на огнување

    —— Премногу ниска температура на огнување —— Соодветно зголемување на температурата на огнување

    Циклуси А-6

    —— Премногу циклуси —— Оптимизирајте го бројот на циклусот

    П: Колку шаблонска ДНК треба да се додаде во 50 μl PCR реакционен систем?
    ytry
    П: Како да се засилат долгите фрагменти?

    Првиот чекор е да се избере соодветна полимераза. Редовната Taq полимераза не може да се лекторира поради недостаток на активност на 3'-5 'егзонуклеаза, а несовпаѓањето во голема мера ќе ја намали ефикасноста на продолжувањето на фрагментите. Затоа, редовната Taq полимераза не може ефикасно да ги засили целните фрагменти поголеми од 5 kb. Taq полимеразата со специјална модификација или друга полимераза со голема верност треба да се избере за да се подобри ефикасноста на продолжувањето и да се задоволат потребите за долго засилување на фрагменти. Покрај тоа, засилување на долги фрагменти, исто така, бара соодветно прилагодување на дизајнот на прајмер, време на денатурација, време на продолжување, тампон pH вредност, итн. Обично, прајмерите со 18-24 п.п. може да доведат до подобар принос. Со цел да се спречи оштетување на шаблонот, времето на денатурација на 94 ° C треба да се намали на 30 секунди или помалку по циклус, а времето за покачување на температурата на 94 ° C пред засилување треба да биде помало од 1 мин. Покрај тоа, поставувањето на температурата за продолжување на околу 68 ° C и дизајнирањето на времето на продолжување според стапката од 1 kb/min може да обезбеди ефикасно засилување на долги фрагменти.

    П: Како да се подобри верноста на засилување на ПЦР?

    Стапката на грешка при засилување на ПЦР може да се намали со употреба на разни ДНК полимерази со голема верност. Меѓу сите пронајдени досега полимерази на Taq DNA, Pfu ензимот има најниска стапка на грешка и најголема верност (видете ја приложената табела). Покрај селекцијата на ензими, истражувачите можат дополнително да ја намалат стапката на мутација на ПЦР со оптимизирање на условите на реакција, вклучувајќи оптимизирање на тампон составот, концентрација на термостабилна полимераза и оптимизирање на бројот на циклусот на ПЦР.

    Напишете ја вашата порака овде и испратете ни ја