Крв Директен комплет за ПЦР

Брзо засилување на целниот ген директно користејќи крв како образец без екстракција.

Овој комплет усвојува генетски дизајнирана анти-инхибиторска ДНК полимераза за ефикасно засилување на гените од една копија во човечкиот геном. Добро оптимизираниот тампон систем во овој комплет и помага на полимеразата силно да се спротивстави на инхибицијата на инхибиторите на ПЦР, со што може директно да ја засили ДНК користејќи крв и култивирани клетки како шаблони. Овој производ е лесен за ракување и не бара комплицирани чекори како што е прочистување на ДНК или предтретман на примероци.
Овој комплет е даден како 2 × MasterMix, а реакцијата може да се изврши со едноставно додавање на образецот за крв и соодветните прајмери ​​за откривање. Може да се примени на култивирани клетки на цицачи како што се луѓе, глувци, свињи, говеда и други видови, како и свежа или 4 -крио -конзервирана целокупна крв, антикоагулант (ЕДТА, цитрат, хепарин), течни згрутчување на крвта и суви крвни дамки складирани на комерцијалните картички Whatman 903 и FTA Elute.

Мачка. Бр Големина на пакување
4992529 20 µl × 100 rxn
4992530 20 µl × 500 rxn

Детали за производот

Експериментален пример

Најчесто поставувани прашања

Тагови на производи

Карактеристики

■ Едноставно и брзо: засилување на ПЦР може директно да се изврши со употреба на крв како образец, без потреба од досадни чекори за подготовка на примерок и екстракција на ДНК.
■ Висока чистота: Прескокнувањето на чекорите пред третман и екстракција на ДНК чекори може да помогне да се избегне вкрстена контаминација на примероците.
■ Висок проток: Идентификацијата на ПЦР за примероци од големи размери може да се изврши со комбинирање на комплетот со ПЦР плочи со 96/384 бунари.
Rong Силна универзалност: Овој комплет може ефикасно да ги засили високите GC фрагменти или фрагменти со комплексна секундарна структура, а должината на засилување може да биде до 5 kb.
Силна отпорност на стрес: Овој комплет може да се примени за различни видови и примероци на крв зачувани на различни начини.

Апликации

Производите на ПЦР од овој комплет содржат „А“ на крајот од 3′, што може директно да се користи за ТА векторско клонирање. Овој комплет може да се користи за засилување на фрагменти од геномска ДНК, генетска анализа со висока пропусност и анализа на генотипизација (како што е детекција на гени).

Сите производи може да се прилагодат за ODM/OEM. За детали,кликнете на Приспособена услуга (ODM/OEM)


  • Претходно:
  • Следно:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Користејќи ја човечката ЕДТА антикоагулација како шаблон, 4 гени со различна содржина на ГЦ беа засилени со Blood Direct PCR комплет. Реакцискиот систем на ПЦР беше 20 μl, а како шаблон се користеше 1 μl крв.
    М: ТИАНГЕН Маркер II; 1: Големина на фрагмент 1090 bp, содржина на GC 68,1%; 2: Големина на фрагмент 1915 bp, содржина на GC 70,4%; 3: Големина на фрагмент 448 bp, содржина на GC 74,8%; 4: Големина на фрагмент 1527 bp, содржина на GC 61,5%.
    Експериментални резултати: Blood Direct PCR Kit може ефикасно да ги засили фрагментите на ДНК со содржина на GC во опсег од 61,5%-74,8%, што укажува на тоа дека е способно да ги засили фрагментите со висок GC.
    Experimental Example Користејќи ја човечката ЕДТА антикоагулација како образец, 5 гени со различна должина (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 и Hn4.0) беа засилени со Blood Direct PCR комплет. Реакцискиот систем на ПЦР беше 20 μl, а како шаблон се користеше 1 μl крв.
    М: ТИАНГЕН Маркер II; 1-3: 3 различни примероци на крв; NTC: контрола без прајмери. Експериментални резултати: Blood Direct PCR Kit може да ги засили фрагментите со должина до 4 kb, што укажува дека е способно да засили долги фрагменти.
    Experimental Example Користејќи човечка ЕДТА антикоагулација како шаблон, Blood Direct PCR Kit беше користен за PCR откривање на различни примероци од крв. Реакцискиот систем на ПЦР беше 20 μl, а како шаблон се користеше 1 μl крв.
    М: ТИАНГЕН Маркер II; 1-9: количината на оптоварување на крвта е 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl и 5 μl, соодветно; NTC: контрола без образец
    Експериментални резултати: Blood Direct PCR Kit има силна отпорност на крв и може да ги засили примероците од крв со опсег на оптоварување од 0,1-5 μl.
    Experimental Example Како шаблони се користеа примероци од крв од човечки, стаорци, пилешки и други видови со различен третман. Комплетот Blood Direct PCR Kit беше искористен за засилување на PRNP (човечки, 750 bp), Actin (стаорци, 200 bp) и β-Actin (пилешко, 1,0 kb). Реакцискиот систем на ПЦР беше 20 μl, а како шаблон се користеше 1 μl крв. М: ТИАНГЕН Маркер II.
    Експериментални резултати: Blood Direct PCR Kit може да се примени на широк спектар на примероци, а директно PCR откривање може да се изврши на примероци од крв од различни видови со различни третмани.
    П: Нема појаси за засилување

    Шаблон А-1

    ■ Шаблонот содржи нечистотии од протеини или инхибитори на Taq, итн. —— Прочистете го образецот на ДНК, отстранете ги нечистотиите од протеините или извлечете ДНК на шаблонот со комплети за прочистување.

    ■ Денатурацијата на шаблонот не е целосна —— Соодветно зголемување на температурата на денатурација и продолжување на времето на денатурација.

    Deg Деградација на шаблон-—Подгответе го образецот.

    А-2 Буквар

    Or Лош квалитет на прајмери-—По-синтетизирајте го прајмерот.

    Deg Деградација на прајмер —— Поделете ги прајмерите со висока концентрација во мал волумен за зачувување. Избегнувајте повеќекратно замрзнување и одмрзнување или долгорочно крио-конзервирано 4 ° C.

    Несоодветен дизајн на прајмери ​​(на пр. Должината на прајмерот не е доволна, димер формиран помеѓу прајмерите итн.)

    А-3 мг2+концентрација

    ■ Мег2+ концентрацијата е премногу ниска —— Правилно зголемување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-4 Температура на огревање

    ■ Високата температура на печење влијае врз врзувањето на прајмерот и шаблонот. - Намалете ја температурата на огнот и оптимизирајте ја состојбата со градиент од 2 ° C.

    А-5 Време на продолжување

    ■ Кратко време на продолжување —— Зголемете го времето на продолжување.

    П: Лажно позитивно

    Феномени: Негативните примероци исто така ги покажуваат опсезите на целната секвенца.

    А-1 Контаминација на ПЦР

    ■ Вкрстена контаминација на целната секвенца или производи за засилување —— Внимателно да не го пипетирате примерокот што содржи целна секвенца во негативниот примерок или да не го истурите од цевката за центрифуга. Реагенсите или опремата треба да бидат автоклавирани за да се елиминираат постојните нуклеински киселини, а постоењето на контаминација треба да се утврди преку негативни контролни експерименти.

    Контаминација со реагенс —— Активирајте ги реагенсите и чувајте ги на ниска температура.

    А-2 премиерr

    ■ Мег2+ концентрацијата е премногу ниска —— Правилно зголемување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    Неправилен дизајн на прајмер, а целната секвенца има хомологија со нишантната секвенца. —— Редизајнирани буквари.

    П: Неспецифично засилување

    Феномени: Лентите за засилување на ПЦР се неконзистентни со очекуваната големина, големи или мали, или понекогаш се појавуваат и специфични појаси за засилување и неспецифични појаси.

    А-1 Буквар

    ■ Лоша специфичност на прајмерот

    --— Буквар за повторно дизајнирање.

    Concentration Концентрацијата на прајмерот е премногу висока —— Правилно зголемување на температурата на денатурација и продолжување на времето на денатурација.

    А-2 мг2+ концентрација

    ■ На Mg2+ концентрацијата е превисока —— Правилно намалете ја концентрацијата на Mg2+: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Прекумерна количина ензим —— Намалете ја количината на ензим соодветно во интервали од 0,5 У.

    А-4 Температура на огревање

    Temperature Температурата на загревање е премногу ниска-—соодветно зголемете ја температурата на огнување или усвојте го двостепениот метод на загревање

    Циклуси А-5 ПЦР

    ■ Премногу PCR циклуси —— Намалете го бројот на PCR циклуси.

    П: Лепливи или размачкани ленти

    А-1 Буквар—— Лоша специфичност —— Редизајнирајте го прајмерот, сменете ја положбата и должината на прајмерот за да ја подобрите неговата специфичност; или изведете вгнездени ПЦР.

    Шаблон ДНК А-2

    - Шаблонот не е чист - Прочистете го образецот или извлечете ДНК со комплети за прочистување.

    А-3 мг2+ концентрација

    - —Мг2+ концентрацијата е превисока —— Правилно намалување на Mg2+ концентрација: Оптимизирајте го Mg2+ концентрација со серија реакции од 1 mM до 3 mM со интервал од 0,5 mM за да се одреди оптималниот Mg2+ концентрација за секој образец и прајмер.

    А-4 dNTP

    - Концентрацијата на dNTP е превисока - соодветно намалете ја концентрацијата на dNTP

    А-5 Температура на огнување

    —— Премногу ниска температура на огнување —— Соодветно зголемување на температурата на огнување

    Циклуси А-6

    —— Премногу циклуси —— Оптимизирајте го бројот на циклусот

    П: Колку шаблонска ДНК треба да се додаде во 50 μl PCR реакционен систем?
    ytry
    П: Како да се засилат долгите фрагменти?

    Првиот чекор е да се избере соодветна полимераза. Редовната Taq полимераза не може да се лекторира поради недостаток на активност на 3'-5 'егзонуклеаза, а несовпаѓањето во голема мера ќе ја намали ефикасноста на продолжувањето на фрагментите. Затоа, редовната Taq полимераза не може ефикасно да ги засили целните фрагменти поголеми од 5 kb. Taq полимеразата со специјална модификација или друга полимераза со голема верност треба да се избере за да се подобри ефикасноста на продолжувањето и да се задоволат потребите за долго засилување на фрагменти. Покрај тоа, засилување на долги фрагменти, исто така, бара соодветно прилагодување на дизајнот на прајмер, време на денатурација, време на продолжување, тампон pH вредност, итн. Обично, прајмерите со 18-24 п.п. може да доведат до подобар принос. Со цел да се спречи оштетување на шаблонот, времето на денатурација на 94 ° C треба да се намали на 30 секунди или помалку по циклус, а времето за покачување на температурата на 94 ° C пред засилување треба да биде помало од 1 мин. Покрај тоа, поставувањето на температурата за продолжување на околу 68 ° C и дизајнирањето на времето на продолжување според стапката од 1 kb/min може да обезбеди ефикасно засилување на долги фрагменти.

    П: Како да се подобри верноста на засилување на ПЦР?

    Стапката на грешка при засилување на ПЦР може да се намали со употреба на разни ДНК полимерази со голема верност. Меѓу сите пронајдени досега полимерази на Taq DNA, Pfu ензимот има најниска стапка на грешка и најголема верност (видете ја приложената табела). Покрај селекцијата на ензими, истражувачите можат дополнително да ја намалат стапката на мутација на ПЦР со оптимизирање на условите на реакција, вклучувајќи оптимизирање на тампон составот, концентрација на термостабилна полимераза и оптимизирање на бројот на циклусот на ПЦР.

    Напишете ја вашата порака овде и испратете ни ја