Комплет за чисто ткиво RNAprep

А-1 Клеточна лиза или хомогенизација не е доволна

---- Намалете ја употребата на примерокот, зголемете ја количината на тампон за лиза, зголемете ја хомогенизацијата и времето на лиза.

А-2 Количината на примерокот е преголема

---- Намалете ја количината на примерок што се користи или зголемете ја количината на тампон за лиза.

А-1 Недоволна лизна клетка или хомогенизација

---- Намалете ја употребата на примерокот, зголемете ја количината на тампон за лиза, зголемете ја хомогенизацијата и времето на лиза.

А-2 Количината на примерокот е преголема

---- Ве молиме погледнете го максималниот капацитет за обработка.

РНК А-3 не е целосно елуирана од колоната

---- По додавање вода без RNase, оставете ја неколку минути пред центрифугирање.

А-4 етанол во елуентот

---- По испирање, центрифугирајте повторно и отстранете го пуферот за перење колку што е можно повеќе.

Медиумот за култура А-5 Cell не е целосно отстранет

---- Кога собирате клетки, ве молиме да го отстраните медиумот за култура колку што е можно повеќе.

А-6 Клетките складирани во RNAstore не се ефикасно центрифугирани

---- Густината на RNA продавницата е поголема од просечниот медиум за клеточна култура; така што центрифугалната сила треба да се зголеми. Се предлага да се центрифугира на 3000x g.

А-7 Ниска содржина и изобилство на РНК во примерокот

---- Користете позитивен примерок за да одредите дали нискиот принос е предизвикан од примерокот.

А-1 Материјалот не е свеж

---- Свежите ткива треба веднаш да се складираат во течен азот или веднаш да се стават во реагенсот RNAstore за да се обезбеди ефект на екстракција.

А-2 Количината на примерокот е преголема

---- Намалете го износот на примерокот.

А-3 RNase контаминацијаn

---- Иако баферот даден во комплетот не содржи RNase, лесно е да се контаминира RNase за време на процесот на екстракција и треба внимателно да се ракува.

А-4 Загадување со електрофореза

---- Заменете го баферот за електрофореза и проверете дали потрошниот материјал и баферот за полнење се ослободени од контаминација со RNase.

А-5 Премногу оптоварување за електрофореза

---- Намалете го количеството на оптоварување на примерокот, оптоварувањето на секој бунар не треба да надминува 2 μg.

А-1 Количината на примерокот е премногу голема

---- Намалете го износот на примерокот.

A-2 Некои примероци имаат висока содржина на ДНК и може да се третираат со DNase.

---- Изведете DNase третман без RNase на добиениот раствор на РНК, и РНК може директно да се користи за последователни експерименти по третманот, или може дополнително да се прочисти со комплети за прочистување на РНК.

За стаклени производи, печени на 150 ° C 4 часа. За пластични садови, потопени во 0,5 M NaOH 10 минути, потоа темелно исплакнете со вода без RNase и потоа стерилизирајте за целосно отстранување на RNase. Реагенсите или растворите што се користат во експериментот, особено водата, мора да бидат без RNase. Користете вода без RNase за сите препарати за реагенс (додадете вода во чисто стаклено шише, додадете DEPC до конечна концентрација од 0,1% (V/V), протресете преку ноќ и автоклав).